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1.分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
3.空白管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入20μL蒸馏水,20μL试剂二,140μL试剂一,20μL试剂三,于340nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A1,第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1
2.细菌、线个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300wຫໍສະໝຸດ Baidu超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)和蒸馏水。
磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和6PGDH依次催化NADPH合成,与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外,6PGDH逆境生理中具有重要作用。
活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
活性单位定义:每104个细胞每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
ε:NADPH摩尔消光系数,6220L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5 cm;V反总:反应体系总体积,0.0002 L;Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL,需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;V样:反应体系中加入粗酶液体积,0.02mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,3 min。
活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
活性单位定义:每104个细胞每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
(1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在提取当日完成酶活性测定,粗酶液避免反复冻融;
活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
活性单位定义:每毫升液体每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
ε:NADPH摩尔消光系数,6220L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应体系总体积,0.0002 L;Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL,需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;V样:反应体系中加入粗酶液体积,0.02mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,3 min。
活性单位定义:每毫升液体每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。